Revision 2

#78451Store at -20C

1 个试剂盒

(6 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
VEGF-A (E9X8Q) Rabbit mAb 50661 20 µl 16, 20, 23, 26 kDa Rabbit IgG
VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb 9698 20 µl 210, 230 kDa Rabbit IgG
Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb 2478 20 µl 230 kDa Rabbit IgG
PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb 3169 20 µl 190 kDa Rabbit IgG
Phospho-PDGF Receptor β (Tyr751) (88H8) Mouse mAb 3166 20 µl 190 kDa Mouse IgG2b
FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb 9740 20 µl 92 , 120, 145 kDa Rabbit IgG
Phospho-FGF Receptor 1 (Tyr653/654) (D4X3D) Rabbit mAb 52928 20 µl 120, 145 kDa Rabbit IgG
Phospho-Tie2 (Tyr992) Antibody 4221 20 µl 160 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Tie2 (D9D10) Rabbit mAb 7403 20 µl 160 kDa Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting the activation of VEGF receptor 2, FGF receptor 1, PDGF receptor beta, Tie2, and VEGF-A using phospho-specific and control antibodies. The kit includes enough antibodies to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/mL BSA, 50% glycerol, and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Angiogenesis is defined as the physiological process by which new blood vessels are formed from pre-existing blood vessels. It is a critical process that enables specific physiological conditions in healthy adults, including development, skeletal muscle hypertrophy, and wound healing (1,2). Angiogenesis can be aberrantly activated to generate new blood vessels during pathological conditions such as cancer, neovascular disorders, and chronic inflammation. Angiogenesis is a complicated process regulated by multiple mechanisms and pathways (3). VEGFR2 is a member of the family of receptor tyrosine kinases (RTKs) mainly located in endothelial cells and is a major player in angiogenesis. VEGF-VEGFR2 ligand-receptor activation is the key signaling pathway for angiogenesis activation (4,5). Multiple non-VEGF RTK activations can replace VEGFR to promote angiogenesis (6,7), including PDGFR (9), FGFR (8), and Tie2 (10). These RTKs are targets for an antiangiogenic based disease treatment (11,12).

  1. Malapelle, U. and Rossi, A. (2019) Expert Opin Emerg Drugs 24, 71-81.
  2. Chung, A.S. et al. (2010) Nat Rev Cancer 10, 505-14.
  3. Jain, R.K. (2003) Nat Med 9, 685-93.
  4. Leung, D.W. et al. (1989) Science 246, 1306-9.
  5. Jeltsch, M. et al. (2013) Cold Spring Harb Perspect Biol 5, a009183. doi: 10.1101/cshperspect.a009183.
  6. Zhao, Y. and Adjei, A.A. (2015) Oncologist 20, 660-73.
  7. Vimalraj, S. (2022) Int J Biol Macromol 221, 1428-1438.
  8. Lieu, C. et al. (2011) Clin Cancer Res 17, 6130-9.
  9. Hellberg, C. et al. (2010) Recent Results Cancer Res 180, 103-14.
  10. Duran, C.L. et al. (2021) Cancers (Basel) 13, 5730. doi: 10.3390/cancers13225730.
  11. Ramjiawan, R.R. et al. (2017) Angiogenesis 20, 185-204.
  12. Socinski, M.A. (2011) Cancer Treat Rev 37, 611-7.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 2
    #78451

    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit

    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb #3169 对 3T3 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    对使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb（绿色，左图）、β3-Tubulin (E9F3E) Mouse mAb #45058（红色，右图）和 DAPI #4083（蓝色，右图）标记的固定冷冻的小鼠小脑组织进行共聚焦免疫荧光分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    对使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb（绿色，左图）、β3-Tubulin (E9F3E) Mouse mAb #45058（红色，右图）和 DAPI #4083（蓝色，右图）标记的固定冷冻的小鼠脑皮质组织进行共聚焦免疫荧光分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 VEGF-A (E9X8Q) Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。VEGF-A 蛋白在 HuT 102 细胞中阴性表达与预测的表达模式一致。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    以浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）作为对照，使用 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb（实线）对 A-204 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb 可特异性结合磷酸化的 VEGFR2，但不能结合其他磷酸化的酪氨酸激酶。使用 Phospho-VEGF Receptor-2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb（上）和 Phospho-Tyrosine mAb (P-Tyr-100) #9411（下），对表达不同激活酪氨酸激酶蛋白的细胞提取物进行蛋白质印迹分析。CKR/PAE 细胞（泳道 12 和 13）表达包含人 CSF-1 胞外结合域/小鼠 VEGF 受体 2 胞内域的嵌合受体 (7)。CSF-1 会刺激 VEGF 受体 2 结构域（泳道 12）Tyr1175 的磷酸化，这可通过 Phospho-VEGF Receptor-2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb 进行特异性检测。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-PDGF Receptor β (Tyr751) (88H8) Mouse mAb，对 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析，该细胞未经处理或以 PDGF (50 ng/ml，5分钟)和/或按指定要求以牛小肠激酶 (CIP) 处理。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 Phospho-Tie2 (Tyr992) Antibody 对转染野生型 Tie2（泳道 1）或转染空载（泳道 2）的 293 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。当转染成 293 个细胞时，Tie2 被组成性激活。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    对 U-87 细胞提取物的 VEGF-A 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 VEGF-A (E9X8Q) Rabbit mAb。使用 VEGF-A (E9X8Q) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb (HRP Conjugate) #5127 用作二抗。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-FGF 受体 1 (Tyr653/654) (D4X3D) 兔单克隆抗体（上图）和 FGF 受体 1 (D8E4) XP® 兔单克隆抗体 #9740（下图）对未处理的 (-) 或已经肝素（1 μg/mL，5 分钟）处理，随后再用人源碱性成纤维细胞生长因子 (hFGF basic/FGF2) #61977处理（100 ng/mL，5 分钟，+）的 A-204 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用Tie2 (D9D10) Rabbit mAb 对 HUVEC 和 HMVEC 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb（VEGFR2 表达，上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb (#8457)（用于上样对照）对 HUVE 细胞、Hela 细胞和小鼠心脏细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。（80 kDa 的条带表示部分降解产物）。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb（上）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下）对 A-204（FGFR1 阳性）、KG-1a（FGFR1 致癌分子伴侣-FGFR1 融合）、A172（(FGFR1 低）和 HT-29（FGFR1 阴性）细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr1175) (19A10) Rabbit mAb（上）和 VEGF Receptor 2 (55B11) Rabbit mAb #2479（下），对未经处理或用 VEGF 刺激（50 ng/ml，2 分钟）的 HUVE 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Phospho-Tie2 (Tyr992) Antibody（上图）或 Tie2 antibody（下图）对过表达野生型（泳道 1）或激酶死亡型（泳道 2）的 GST -人 Tie2 激酶结构域融合蛋白的 Sf9 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。野生型 Tie2 激酶结构域在 Sf9 细胞中过表达时被组成性磷酸化。GST-Tie2 融合蛋白的分子量大约为 65 kDa。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    对依次经肝素（1 μg/mL，5 分钟）和人源碱性成纤维细胞生长因子(hFGF basic/FGF2) #61977（100 ng/mL，5 分钟）处理的 A-204 细胞的磷酸化 FGF 受体 1 (Tyr653/654) 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 敲入，泳道 2 为兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900，泳道 3 为 Phospho-FGF 受体 1(Tyr653/654) (D4X3D) 兔单克隆抗体。使用 Phospho-FGF 受体 1(Tyr653/654) (D4X3D) 兔单克隆抗体作为一抗来进行蛋白印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人血管肉瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人成胶质细胞瘤细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Phospho-FGF 受体 1 (Tyr653/654) (D4X3D) 兔单克隆抗体（上图，绿色）和 FGF 受体 1 (D8E4) XP® 兔单克隆抗体 #9740（下图，绿色）对未处理的（左图），经肝素（1 μg/mL，5 分钟）处理且随后添加人源碱性成纤维细胞生长因子 (hFGF basic/FGF2) #61977（100 ng/mL，5 分钟；中间），或经肝素/FGF2 处理并且随后用 λ 磷酸酶处理（2 小时；右图）的血清饥饿 A-204 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠肝细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肾细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的且显示膜定位的 U-87MG 细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 VEGFR2 (D5B1) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HCC827 异种移植物进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    使用 VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb（绿色）和 β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (IF Preferred) #2677（红色）对大鼠胰腺细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 A-204 细胞沉淀物（左图，阳性）或 HT-29 细胞沉淀物（右图，阴性）进行免疫组织化学分析。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 31 Expand Image
    使用 PDGF Receptor β (28E1) Rabbit mAb （绿色）对血清饥饿（左图）或已经 PDGF 处理（右图）的 NIH/3T3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 32 Expand Image
    使用 VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对固定和通透的 HeLa 细胞（蓝色，阴性）和 HUVE 细胞（绿色，阳性）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Angiogenesis Receptor Tyrosine Kinase Antibody Sampler Kit: Image 33 Expand Image
    使用 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb（绿色）对 A204 细胞（阳性，左）、KG-1 细胞（阳性，中间）和 A172 细胞（弱表达，右）进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
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