Revision 4

#61949Store at -20C

1 个试剂盒

(3 x 20 microliters)

Cell Signaling Technology

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Support: 877-678-TECH (8324)

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Androgen Receptor (E3S4N) Rabbit mAb (Carboxy-terminal Antigen) 70317 20 µl 110 kDa Rabbit IgG
Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 5153 20 µl 110 kDa Rabbit IgG
Androgen Receptor (AR-V7 Specific) (E3O8L) Rabbit mAb 19672 20 µl 80 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Androgen Receptor Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting full-length Androgen Receptor and AR-V7 isoforms. The kit includes enough antibody to perform two western blot experiments with each primary antibody.

Background

Androgen receptor (AR), a zinc finger transcription factor belonging to the nuclear receptor superfamily, is activated by phosphorylation and dimerization upon ligand binding (1). This promotes nuclear localization and binding of AR to androgen response elements in androgen target genes. Research studies have shown that AR plays a crucial role in several stages of male development and the progression of prostate cancer (2,3).

The AR3 or AR-V7 isoform, which lacks the typical ligand binding domain, is created through the alternative splicing of cryptic exons (4-5). AR-V7 is frequently expressed in castration-resistant prostate cancer (CRPC) and while dependent on the activity of the full-length androgen receptor (AR-FL), AR-V7 can activate a completely distinct transcriptional program (6-8). While enzalutamide and abiraterone have been beneficial in treating CRPC through the ligand binding domain of AR-FL, resistance in patients has been shown to be associated with AR-V7 detection in circulating tumor cells (9-12). Studies probing into mechanisms of overcoming this resistance are currently being explored and may help in stratifying patient populations for more personalized therapies (13-15).

  1. Li, J. and Al-Azzawi, F. (2009) Maturitas 63, 142-8.
  2. Avila, D.M. et al. J Steroid Biochem Mol Biol 76, 135-42.
  3. Montgomery, J.S. et al. (2001) J Pathol 195, 138-46.
  4. Hu, R. et al. (2009) Cancer Res 69, 16-22.
  5. Guo, Z. et al. (2009) Cancer Res 69, 2305-13.
  6. Watson, P.A. et al. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A 107, 16759-65.
  7. Sun, S. et al. (2010) J Clin Invest 120, 2715-30.
  8. Hu, R. et al. (2012) Cancer Res 72, 3457-62.
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  12. Antonarakis, E.S. et al. (2014) N Engl J Med 371, 1028-38.
  13. Liu, C. et al. (2014) Clin Cancer Res 20, 3198-3210.
  14. Sarwar, M. et al. (2016) Oncotarget 7, 63065-63081.
  15. Ku, S.Y. et al. (2017) Science 355, 78-83.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 4
    #61949

    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit

    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (AR-V7 Specific) (E3O8L) Rabbit mAb #19672 对 22Rv-1 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb（下图）对 LNCaP (AR+)、VCaP (AR & AR-V7+)、22Rv1 (AR & AR-V7+) 和 PC-3 (AR-) 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb #5153 对 LNCaP 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (AR-V7 Specific) (E3O8L) Rabbit mAb（上图）和 Β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。在 22Rv1 和 VCAP 细胞（AR-V7 阳性）中检测到与雄激素受体 V7 同工型相对应的信号，但未在 LNCaP 和 DU 145 细胞（AR-V7 阴性）中检测到，从而确认了该抗体的特异性。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005 对经过 10 nM DHT 处理 4 小时的 22-RV-1 细胞中的交联染色质以及 Androgen Receptor (AR-V7 Specific) (E3O8L) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SPINK5 upstream primers、ABCB5 upstream primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（上图）和 β-Actin Antibody #4967（下图）对 LNCaP (AR+)、MCF7 (AR+)、PC-3 (AR-) 和 DU 145 (AR-) 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了雄激素受体的已知靶基因 KLK2 内的结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用雄激素受体 (E3S4N) 兔单克隆抗体（羧基末端抗原）（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白印迹分析。正如预期，DU 145 细胞的雄激素受体表达呈阴性。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    对 22Rv1 细胞提取物 AR-V7 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Androgen Receptor (AR-V7 Specific) (E3O8L) Rabbit mAb。使用 Androgen Receptor (AR-V7) (E3O8L) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 LNCaP（AR+，左图）和 DU145（AR-，右图）进行免疫组织化学分析。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了染色体 19（上图）内的结合，包括雄激素受体的已知靶基因 KLK2（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    对 LNCaP 细胞提取物雄激素受体进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% 敲入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为雄激素受体 (E3S4N) 兔单克隆抗体（羧基末端抗原）。使用雄激素受体 (E3S4N) 兔单克隆抗体（羧基末端抗原）进行蛋白印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #66362，对在无酚红色培养基和 5% 活性炭炭剥离的 FBS 生长 3 天后再用双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞和 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #86652 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP® Human KLK2 Intron 1 Primers #62086 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时聚合酶链反应 (PCR) 对富集 DNA 进行量化分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    Confocal immunofluorescent analysis of LNCaP cells (left, positive) and DU 145 cells (right, negative) usingAndrogen Receptor (E3S4N) Rabbit mAb (Carboxy-terminal Antigen) (green). 肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（绿色），对 LNCaP（阳性，左）和 DU145（阴性，右）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对 DU-145 细胞（蓝色）和 LNCaP 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒（磁珠法） #9005 对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 3 天，随后用双氢睾酮 (DHT，10 nM) 处理 4 小时的 LNCaP 细胞的交联染色质与雄激素受体 (D6F11) XP® 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在雄激素受体的已知靶基因 KLK2 内结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 SimpleChIP® 酶解染色质免疫共沉淀试剂盒（磁珠法） #9005 对在无酚红培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 3 天，随后用双氢睾酮 (DHT，10 nM) 处理 4 小时的 LNCaP 细胞的交联染色质与雄激素受体 (D6F11) XP® 兔单克隆抗体进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示了染色体 19（上图）内的结合，包括雄激素受体的已知靶基因 KLK2（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    Androgen Receptor Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对在无酚红培养基和 5% 炭剥离的 FBS 中培养 3天，随后用 双氢睾酮（DHT，10 nM）处理 4 小时的 LNCaP 细胞中提取的交联染色质，在加入 Androgen Receptor (D6F11) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729​ 后，进行染色质免疫沉淀。使用 using SimpleChIP® Human KLK2 Intron 1 Primers #62086, SimpleChIP® Human KLK3 Promoter Primers #32784 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486， 通过实时 PCR 对富集 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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