Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P40763

Entrez-Gene Id:

6774

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 9145 100 µl H M R Mk 79, 86 Rabbit IgG
Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb 12640 100 µl H M R Mk 79, 86 Rabbit IgG

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

The Stat3 transcription factor is an important signaling molecule for many cytokines and growth factor receptors (1) and is required for murine fetal development (2). Research studies have shown that Stat3 is constitutively activated in a number of human tumors (3,4) and possesses oncogenic potential (5) and anti-apoptotic activities (3). Stat3 is activated by phosphorylation at Tyr705, which induces dimerization, nuclear translocation, and DNA binding (6,7). Transcriptional activation seems to be regulated by phosphorylation at Ser727 through the MAPK or mTOR pathways (8,9). Stat3 isoform expression appears to reflect biological function as the relative expression levels of Stat3α (86 kDa) and Stat3β (79 kDa) depend on cell type, ligand exposure, or cell maturation stage (10). It is notable that Stat3β lacks the serine phosphorylation site within the carboxy-terminal transcriptional activation domain (8).

  1. Heim, M.H. (2001) J Recept Signal Transduct Res 19, 75-120.
  2. Takeda, K. et al. (1997) Proc Natl Acad Sci U S A 94, 3801-4.
  3. Catlett-Falcone, R. et al. (1999) Immunity 10, 105-15.
  4. Garcia, R. and Jove, R. (1998) J Biomed Sci 5, 79-85.
  5. Bromberg, J.F. et al. (1999) Cell 98, 295-303.
  6. Darnell, J.E. et al. (1994) Science 264, 1415-21.
  7. Ihle, J.N. (1995) Nature 377, 591-4.
  8. Wen, Z. et al. (1995) Cell 82, 241-50.
  9. Yokogami, K. et al. (2000) Curr Biol 10, 47-50.
  10. Biethahn, S. et al. (1999) Exp Hematol 27, 885-94.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    U.S. Patent No. 7,429,487, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.
    All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

    限制使用

    除非 CST 的合法授书代表以书面形式书行明确同意，否书以下条款适用于 CST、其关书方或分书商提供的书品。 任何书充本条款或与本条款不同的客书条款和条件，除非书 CST 的合法授书代表以书面形式书独接受， 否书均被拒书，并且无效。

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #8204

    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet

    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb #9145（上图）、Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb #12640（中图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对未经处理或已经过 IFNa（#36000，100 ng/mL，5 分钟）或 IFNg（#80385，100 ng/mL，30 分钟）处理的 HeLa 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb #9145 对经过 IFN-α（100 ng/mL，5 分钟）处理的血清饥饿 HeLa 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图），对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。PC-3 细胞的 Stat3 显阴性。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb，对 IFN-α 处理的 Jurkat 细胞、Hela 细胞（左）、经 EGF 处理的 A431 细胞（右）提取物进行蛋白质印迹分析。注意，抗体可检测 A431 的基础磷酸化 Stat3。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (泳道 2) 或 Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb (泳道 3)，对Hela 细胞提取物Stat3 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% 输入对照。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    对经人 IFN-α（50 ng/ml，15 分钟）处理的 U266 提取物中的磷酸化 Stat3 (Tyr705) 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb。使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (3E2) Mouse mAb #9138 进行蛋白质印迹法分析。Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076 用作二抗。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb (绿色) 与 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700 (红色)，对血清饥饿处理后未经处理（左上图）或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (100 ng/ml, 30 分钟; 右上图) 处理的 HeLa 细胞，以及血清饥饿处理后未经处理 (右下图) 或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 (100 ng/ml, 30 分钟; 右下图) 处理的 PC-3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb 或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对 PC-3 细胞（蓝色）和 HeLa 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) 用作二抗。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺神经内分泌癌细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 Phosho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 Apc (min/+) 小鼠肠道进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 12 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经饥饿过夜并用 Human Interleukin-6 (hIL-6) #8904 (100 ng/ml) 处理 30 分钟的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 Fos 内结合，Fos 是一种已知的 Stat3 靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 13 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析，显示出胞核定位。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 14 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经饥饿过夜并用 Human Interleukin-6 (hIL-6) #8904 (100 ng/ml) 处理 30 分钟的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 14（上图）内的结合，包括 Stat3 的已知靶标基因 Fos（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb，对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的人乳腺癌（尤其是内皮细胞）进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 16 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对经饥饿过夜并用 Human Interleukin-6 (hIL-6) #8904 (100 ng/ml) 处理 30 分钟的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 17 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 在 SignalSlide® HeLa -/+ IFNa IHC Controls #55861 上（对未经处理（左图）或经 Human Interferon-α1 (hIFN-α1) #8927 处理（右图）的石蜡包埋的 Hela 细胞沉淀物）进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 18 Expand Image
    对 IFN-α 处理（左）或未经处理（右）Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析，用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb（绿色）标记。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经处理（蓝色）或已经过 IFNα（50 ng/ml，15 分钟；绿色）处理的 U266 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 20 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对饥饿过夜后，用 IL-6（100 ng/ml；30 分钟）处理的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 IRF1 内结合，IRF1 是 Phospho-Sata3 的一种已知靶标基因（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 21 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit #56383，对饥饿过夜后，用 IL-6（100 ng/ml）处理30 分钟）的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663、human IRF1 promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行量化。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PhosphoPlus® Stat3 (Tyr705) Antibody Duet: Image 22 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对饥饿过夜后，用 IL-6（100 ng/ml；30 分钟）处理的 Hep G2 细胞中提取的交联染色质，在加入 Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后，进行染色质免疫沉淀。使用 human IRF-1 promoter primers、SimpleChIP® Human c-Fos Promoter Primers #4663 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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