Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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UniProt ID:

#P35222

Entrez-Gene Id:

1499

Product Includes Quantity Reactivity MW(kDa) Isotype
Phospho-β-Catenin (Ser675) (D2F1) XP® Rabbit mAb 4176 100 µl H M R 92 Rabbit IgG
β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 8480 100 µl H M R Mk 92 Rabbit IgG

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Description

PhosphoPlus® Duets from Cell Signaling Technology (CST) provide a means to assess protein activation status. Each Duet contains an activation-state and total protein antibody to your target of interest. These antibodies have been selected from CST's product offering based upon superior performance in specified applications.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

β-catenin is a key downstream effector in the Wnt signaling pathway (1). It is implicated in two major biological processes in vertebrates: early embryonic development (2) and tumorigenesis (3). CK1 phosphorylates β-catenin at Ser45. This phosphorylation event primes β-catenin for subsequent phosphorylation by GSK-3β (4-6). GSK-3β destabilizes β-catenin by phosphorylating it at Ser33, Ser37, and Thr41 (7). Mutations at these sites result in the stabilization of β-catenin protein levels and have been found in many tumor cell lines (8).

  1. Cadigan, K.M. and Nusse, R. (1997) Genes Dev 11, 3286-3305.
  2. Wodarz, A. and Nusse, R. (1998) Annu Rev Cell Dev Biol 14, 59-88.
  3. Polakis, P. (1999) Curr Opin Genet Dev 9, 15-21.
  4. Amit, S. et al. (2002) Genes Dev 16, 1066-76.
  5. Liu, C. et al. (2002) Cell 108, 837-47.
  6. Yanagawa, S. et al. (2002) EMBO J 21, 1733-42.
  7. Yost, C. et al. (1996) Genes Dev 10, 1443-54.
  8. Morin, P.J. et al. (1997) Science 275, 1787-90.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
    PhosphoPlus is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    限制使用

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #11887

    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet

    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 1 Expand Image
    对 HeLa 细胞提取物中的 β-Catenin 进行免疫沉淀。泳道 1 为 10% input，泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 进行沉淀，泳道 3 为 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480。使用 β-Catenin (15B8) Mouse mAb #37477 进行蛋白质印迹法分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 2 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480 对 HeLa 细胞的裂解物 (0.1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 3 Expand Image
    使用 Phospho-β-Catenin (Ser675) (D2F1) XP® Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对对照 HeLa 细胞（泳道 1）或 β-连环蛋白编码基因出现靶突变的 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹分析。突变 HeLa 细胞中 β-Catenin分子量的变化证实了抗体对 β-Catenin的特异性。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 4 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480（上图）或 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对对照 HeLa 细胞（泳道 1）或 β-Catenin编码基因出现明显框内截短突变的 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。突变 HeLa 细胞中 β-Catenin分子量的变化与框内缺失一致。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 5 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 HCT 116 细胞和 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了在 β-Catenin 的已知靶基因 Axin2 内的结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 6 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人前列腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 7 Expand Image
    使用 Phospho-β-Catenin (Ser675) (D2F1) XP® Rabbit mAb（上）或 β-Catenin (6B3) Rabbit mAb #9582（下），对未经处理或经 λ 磷酸酶处理 1 小时，或经 Forskolin (FSK) 处理 30 分钟的 MKN-45 和 SK-N-MC 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 8 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 9 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对 HCT 116 细胞和 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN 分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示了在染色体 17（上图）内的结合，包括 β-Catenin 的已知靶标基因 Axin2（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 10 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠腺癌组织进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-β-Catenin (Ser675) (D2F1) XP® Rabbit mAb（绿色），对大鼠结肠进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 12 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，对 HCT 116 细胞和 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN 分析。使用 SimpleChIP ® Human Axin2 Intron 1 Primers #8973、SimpleChIP® Human CaMK2D Intron 3 Primers #5111和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 13 Expand Image
    在 Leica® BOND™ Rx 上，使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人卵巢浆液性乳头状癌组织进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 14 Expand Image
    使用 Phospho-β-Catenin (Ser675) (D2F1) XP® Rabbit mAb（绿色），对未经处理（左）、经 λ 磷酸酶处理（中）的 Hela 细胞或未经处理的 NCI-H28 细胞（β 连环蛋白缺失；右）进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 15 Expand Image
    使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。

    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 16 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 17 Expand Image
    使用 ß-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb对石蜡包埋的人结肠腺癌进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 18 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 19 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 20 Expand Image
    在对照肽（左图）或抗原特异性肽（右图）存在的情况下，使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的小鼠结肠细胞进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 21 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HeLa（左图）或 NCI-H28（右图）细胞团进行免疫组织化学分析。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 22 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb（绿色）对小鼠结肠进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 23 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb（绿色）对 HeLa（左图）和 NCI-H28（右图）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 24 Expand Image
    使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit Isotype Control #3900（虚线）对 NCI-H28 细胞（绿色）和 Hela 细胞（蓝色）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 25 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对 HCT116 细胞中提取的交联染色质，在加入 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Non-phospho (Active) β-Catenin (Ser33/37/Thr41) (D13A1) Rabbit mAb #8814 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。本图显示整个 AXIN2（β-Catenin的一个已知靶基因）范围内的结合作用（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他图）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 26 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对 HCT116 细胞中提取的交联染色质，在加入 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Non-phospho (Active) β-Catenin (Ser33/37/Thr41) (D13A1) Rabbit mAb #8814 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 17（上图）内的结合，包括 β-Catenin 的已知靶标基因 AXIN2（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    PhosphoPlus® β-Catenin (Ser675) Antibody Duet: Image 27 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 对 HCT 116 细胞的交联染色质，在加入 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀法分析。使用 SimpleChIP®Human Axin2 Intron 1 Primers #8973、SimpleChIP®Human CaMK2D Intron 3 Primers #5111、human c-Myc promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486 并通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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