Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 4370 40 µl 44, 42 kDa Rabbit IgG
Phospho-Progesterone Receptor (Ser190) Antibody 3171 40 µl 90, 118 kDa Rabbit 
Phospho-Progesterone Receptor (Ser345) Antibody 12783 40 µl 90 (PR-A), 118 (PR-B) kDa Rabbit 
Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 8757 40 µl 90 (PR-A), 118 (PR-B) kDa Rabbit IgG
Progesterone Receptor B (C1A2) Rabbit mAb 3157 40 µl 118 kDa Rabbit 
Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb 6943 40 µl 60 kDa Rabbit IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 

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Description

Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit provides an economical means of detecting total and active levels of progesterone receptor (PR) as well as the active forms of PR downstream targets. The kit contains enough primary antibody to perform four western blots per primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Human progesterone receptor (PR) is expressed as two forms: the full length PR-B and the short form PR-A. PR-A lacks the first 164 amino acid residues of PR-B (1,2). Both PR-A and PR-B are ligand activated, but differ in their relative ability to activate target gene transcription (3,4). The activity of PR is regulated by phosphorylation; at least seven serine residues are phosphorylated in its amino-terminal domain. Three sites (Ser81, Ser102, and Ser162) are unique to full length PR-B, while other sites (Ser190, Ser294, Ser345, and Ser400) are shared by both isoforms (5). Phosphorylation of PR-B at Ser190 (equivalent to Ser26 of PR-A) is catalyzed by CDK2 (6). Mutation of Ser190 results in decreased activity of PR (7), suggesting that the phosphorylation at Ser190 may be critical to its biological function. Research studies have demonstrated ligand-dependent phosphorylation of PR-B at Ser345 is catalyzed by MAPK and plays an important role in mediating the proliferation of breast cancer cells. Investigators have shown that Ser345-phosphorylated PR-B associates with Sp1 to regulate EGFR and p21 transcription (8). PR signaling has been shown to crosstalk with other kinase signaling cascades. Upon stimulation and the subsequent interaction with estrogen receptor α and c-Src, PR-B has been shown to promote the activation of the Src/p21ras/Erk pathway (9).

  1. Evans, R.M. (1988) Science 240, 889-95.
  2. Kastner, P. et al. (1990) EMBO J 9, 1603-14.
  3. Giangrande, P.H. et al. (2000) Mol Cell Biol 20, 3102-15.
  4. Wen, D.X. et al. (1994) Mol Cell Biol 14, 8356-64.
  5. Clemm, D.L. et al. (2000) Mol Endocrinol 14, 52-65.
  6. Zhang, Y. et al. (1997) Mol Endocrinol 11, 823-32.
  7. Takimoto, G.S. et al. (1996) J Biol Chem 271, 13308-16.
  8. Faivre, E.J. et al. (2008) Mol Endocrinol 22, 823-37.
  9. Blunt, R.J. et al. (1975) Pflugers Arch 355, 189-204.

Background References

    Trademarks and Patents

    Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #12807

    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit

    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from serum-starved HeLa cells treated with TPA (400 nM, 4 hours) using Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 Phospho-Progesterone Receptor (Ser345) Antibody（上图）或 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP®Rabbit mAb #8757（下图），对在无酚红的培养基和 5% 活性炭剥离的 FBS 中生长 48 小时，随后不用 (-) 或使用普美孕酮 (R5020)（100 nM，1 小时；+）处理的 T-47D 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor B (C1A2) Rabbit mAb 对 MCF-7 和 T47D 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Phospho-Progesterone Receptor (Ser190) Antibody（上图）和对照品 Progesterone Receptor Antibody #3172（下图），对未经处理或已经 100 nM 普美孕酮 (R5020) 刺激 1 小时的 T47D 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370 和 p44/42 MAPK (Erk1/2) (3A7) Mouse mAb #9107，对未经处理或经 U0126 #9903（10 µM，1 小时）或 TPA #4174（200 nM，10 分钟）处理的 COS 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb（上）或 Src (36D10) Rabbit mAb #2109（下），对血清饥饿或经人 Platelet-Derived Growth Factor BB hPDGF-BB #8912 处理（100 ng/ml，15 分钟）的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图），对 T-47D（PR 阳性）和 MDA-MB-231（PR 阴性）细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，以在含 5% 活性炭剥离的 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时、然后用孕激素（R5020，10 nM，1 小时）处理的 T-47D 细胞和 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 SETD9 基因。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    在有对照肽（左图）或抗原特异性肽（右图）的情况下，使用 Progesterone Receptor B Receptor (C1A2) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb（上）或 p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb #4695（下），对经 λ 磷酸酶或 TPA #4174 处理（如图）的 293 NIH/3T3 和 C6 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb（上图）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图），对在添加了 5% 活性炭剥离 FBS 的无酚红培养基中生长 48 小时，然后经赋形剂对照物 (-) 或普美孕酮（R5020，100 nM，16小时；+）处理的 T-47D 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。用 R5020 长时间处理表达 PR 的细胞已知会诱导 PR 表达下调和过度磷酸化，这表现为在 SDS-PAGE 上的迁移变慢。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，以在含 5% 活性炭剥离的 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时、然后用孕激素（R5020，10 nM，1 小时）处理的 T-47D 细胞和 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及染色体 5（上图），包括 SETD9（下图）。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor B Receptor (C1A2) Rabbit mAb（绿色）对 MCF-7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb，对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺浸润性导管癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 CUT&RUN Assay Kit #86652，以在含 5% 活性炭剥离的 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时、然后用孕激素（R5020，10 nM，1 小时）处理的 T-47D 细胞和 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 TBL2 启动子引物和人 OCM2 外显子 1 引物，通过实时 PCR 对富集的 DNA 定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    以非特异性阴性对照抗体（红色）作为对照，使用 Progesterone Receptor B Receptor (C1A2) Rabbit mAb（蓝色）对 T-47D 细胞进行流式细胞分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb，对未经处理（左）或经 λ 磷酸酶处理（右）的石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的 T-47D （高 PR，左图）、MCF-7 （低 PR，中间）和 MDA-MB-231 （PR 阴性，右图）细胞沉淀物进行免疫组织化学分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 对 SignalSlide™ Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) IHC Controls #8103（ 经过 U0126 #9903（左图）或 TPA #4174（右图）处理的石蜡包埋的 NIH/3T3 细胞）进行免疫组织化学分析。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370（绿色）和 S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb #2317（红色），对未经处理（上）或经 λ 磷酸酶处理（下）的果蝇卵泡进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb（绿色），对 T-47D（PR 阳性，左图）和 MDA-MB-231 （PR 阴性，右图）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 24 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb #4370（绿色）和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700（红色），对饥饿过夜，然后用 U0126 #9903（10 uM，2 小时；左）或 PDBu (Phorbol 12,13-Dibutyrate) #12808（100 nM，15 分钟；右）处理的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 25 Expand Image
    使用 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对 MDA-MB-231 细胞（蓝色，阴性）和 T47D 细胞（绿色，阳性）进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 26 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对经 U0126（10 µM，2 小时；绿色）处理或经 TPA #4174 （200 nM，30 分钟；蓝色）处理的 Jurkat 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 27 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对在含有 5% 活性炭剥离 FBS 的培养基中培养 48 小时，然后经普美孕酮（R5020, 10 nM, 1 小时）处理的 T-47D 细胞中提取的染色质，在加入 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示在 FKBP5/FKBP51 内结合，FKBP5/FKBP51 是 Progesterone Receptor A/B 的一个已知靶标基因（见其他含 ChIP-qPCR 数据的图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 28 Expand Image
    使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对在含有 5% 活性炭剥离 FBS 的培养基中培养 48 小时，然后经普美孕酮（R5020, 10 nM, 1 小时）处理的 T-47D 细胞中提取的染色质，在加入 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 后，进行染色质免疫沉淀分析。DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795。结果图显示了染色体 6（上图）内的结合，包括雄激素受体 A/B 的已知靶基因 FKBP5/ FKBP51（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 29 Expand Image
    T-47D 细胞在添加了 5% 活性炭剥离 FBS 的无酚红培养基中培养 48 小时，然后不进行处理（左小图）或用普美孕酮处理（R5020，10 nM，1 小时；右小图）。使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对细胞的交联染色质与 Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb 或Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human FKBP51 Intron 5 Primers #7859、human E2F-1 proximal enhancer site #1 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
    Progesterone Receptor Signaling Antibody Sampler Kit: Image 30 Expand Image
    使用 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) 对 3T3 细胞提取物进行免疫沉淀分析。细胞用 TPA（200 nM，15 分钟）处理。泳道 1 为 10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb。使用 Phosphop44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。使用 Mouse Anti-rabbit IgG (Light-Chain Specific) (D4W3E) mAb #45262 作为二抗。
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