Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Product Includes Product # Quantity Mol. Wt Isotype/Source
Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 9665 40 µl 17, 19, 35 kDa Rabbit IgG
Caspase-6 Antibody 9762 40 µl 15, 35 kDa Rabbit 
Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAb 12827 40 µl 20, 35 kDa Rabbit IgG
Lamin A/C (4C11) Mouse mAb 4777 40 µl 74 (Lamin A), 63 (Lamin C) kDa Mouse IgG2a
Lamin B1 (D4Q4Z) Rabbit mAb 12586 40 µl 68, 25 kDa Rabbit IgG
PARP Antibody 9542 40 µl 89, 116 kDa Rabbit 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl Goat 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl Horse 

Please visit cellsignal.com for individual component applications, species cross-reactivity, dilutions, protocols, and additional product information.

Description

The Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit provides an economical means to evaluate the activation of effector (executioner) caspases. The kit contains enough primary antibody to perform at least four western blots per primary antibody.

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Background

Apoptosis is a regulated physiological process leading to cell death. Caspases, a family of cysteine acid proteases, are central regulators of apoptosis. Caspase-3 (CPP-32, Apoptain, Yama, SCA-1), Caspase-6 (Mch2), and Caspase-7 (CMH-1, Mch3, ICE-LAP3) are effector caspases functioning in cellular apoptotic processes (1-6). Upon apoptotic stimulation, initiator caspases such as caspase-9 (ICE-LAP6, Mch6) are cleaved and activated (7). The activated upstream caspases further process downstream executioner caspases by cleaving them into activated large and small subunits, thereby initiating a caspase cascade leading to apoptosis (4,6,8-10).

PARP, a 116 kDa nuclear poly (ADP-ribose) polymerase, appears to be involved in DNA repair in response to environmental stress (11). This protein can be cleaved by many ICE-like caspases in vitro (1,12) and is one of the main cleavage targets of caspase-3 in vivo (10,13). In human PARP, cleavage occurs between Asp214 and Gly215, which separates the PARP amino-terminal DNA binding domain (24 kDa) from the carboxy-terminal catalytic domain (89 kDa) (10,12). PARP helps cells to maintain their viability; cleavage of PARP facilitates cellular disassembly and serves as a marker of cells undergoing apoptosis (14).

Lamins are nuclear membrane structural components that are important in maintaining normal cell functions, such as cell cycle control, DNA replication, and chromatin organization (15-17). Lamins have been subdivided into types A and B. Type-A lamins consist of lamin A and C, which arise from alternative splicing of the lamin A gene LMNA. Lamin A and C are cleaved by caspases into large (41-50 kDa) and small (28 kDa) fragments, which can be used as markers for apoptosis (18,19). Type-B lamins consist of lamin B1 and B2, encoded by separate genes (20-22). Lamin B1 is also cleaved by caspases during apoptosis (23).

  1. Cohen, G.M. (1997) Biochem J 326 ( Pt 1), 1-16.
  2. Fernandes-Alnemri, T. et al. (1994) J Biol Chem 269, 30761-4.
  3. Faleiro, L. et al. (1997) EMBO J 16, 2271-81.
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  5. Duan, H. et al. (1996) J Biol Chem 271, 1621-5.
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  11. Satoh, M.S. and Lindahl, T. (1992) Nature 356, 356-8.
  12. Lazebnik, Y.A. et al. (1994) Nature 371, 346-7.
  13. Tewari, M. et al. (1995) Cell 81, 801-9.
  14. Oliver, F.J. et al. (1998) J Biol Chem 273, 33533-9.
  15. Dunbar, J.C. and Lu, H. (2000) Brain Res Bull 52, 123-6.
  16. Goldberg, M. et al. (1999) Crit Rev Eukaryot Gene Expr 9, 285-93.
  17. Yabuki, M. et al. (1999) Physiol Chem Phys Med NMR 31, 77-84.
  18. Rao, L. et al. (1996) J Cell Biol 135, 1441-55.
  19. Orth, K. et al. (1996) J Biol Chem 271, 16443-6.
  20. Biamonti, G. et al. (1992) Mol Cell Biol 12, 3499-506.
  21. Lin, F. and Worman, H.J. (1995) Genomics 27, 230-6.
  22. Pollard, K.M. et al. (1990) Mol Cell Biol 10, 2164-75.
  23. Chandler, J.M. et al. (1997) Biochem J 322 ( Pt 1), 19-23.

Background References

    Trademarks and Patents

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    仅供研究使用。不得用于诊断流程。
    Revision 1
    #12690

    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit

    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 1 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb（实线）或浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415（虚线）对 Daudi 细胞（蓝色）和 MJ 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-mouse IgG (H+L)，F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 2 Expand Image
    使用 PARP Antibody #9542 对经过 Staurosporine（1 uM，3 小时）处理的血清饥饿 HeLa 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 3 Expand Image
    使用 Caspase-6 Antibody #9762 对经过细胞色素 C 处理的 Jurkat 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例在 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 4 Expand Image
    使用 Lamin B1 (D4Q4Z) Rabbit mAb #12586（上图）和 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对 HeLa 细胞（泳道 1）或 LMNB1 敲除型细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。LMNB1 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了抗体对 LMNB1 的特异性。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 5 Expand Image
    使用caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAb，对未经 (-) 或经 Etoposide #2200（25 μM，过夜；+）处理的 Jurkat 细胞和 A20 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 6 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb #4777（上图）或 α-actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下图）对对照 HeLa 细胞（泳道 1）或 LMNA 编码基因出现明显框内截短突变的 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。突变 HeLa 细胞中 LMNA 分子量的变化与框内缺失一致。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 7 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 8 Expand Image
    一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*，它可在酶催化的分解期间发光。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 9 Expand Image
    使用 PARP Antibody，对未处理或经 staurosporine 处理的 (1 µM) NIH/3T3 细胞和未处理或经 etoposide 处理的 (25 µM) Jurkat 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 10 Expand Image
    使用 Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 和 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #，对使用 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® Caspase-3 siRNA II (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析2125。Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 确认了 caspase-3 表达的沉默，而 α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb 用于观察上样量和 caspase-3 siRNA 的特异性。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 11 Expand Image
    使用 Caspase-6 Antibody #9762（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对未经处理或已经过细胞色素 c（1 小时，体外 0.25 mg/ml）处理的不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹法分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 12 Expand Image
    使用 Lamin B1 (D4Q4Z) Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 13 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb 对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 14 Expand Image
    使用 Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 和 p42 MAPK Antibody #9108，对使用 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Fluorescein Conjugate) #6201 (-) 或 SignalSilence® Caspase-3 siRNA I (+) 转染的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 确认 caspase-3 表达的沉默，而 p42 MAPK Antibody 用于观察上样量和 caspase-3 的特异性。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 15 Expand Image
    使用 Lamin B1 (D4Q4Z) Rabbit mAb 对未处理或经过 Staurosporine #9953 (1 μM, 3 hr) 处理的 HeLa 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 16 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb 对未经处理或经 Cycloheximide 处理（CHX，10 μg/ml，过夜）后再经 TNF-α #8902处理（20 ng/ml，4 小时）的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 17 Expand Image
    使用 Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 对未经和已经活体 1 μM staurosporine (3 hr)处理的 HeLa（人源）和 NIH/3T3（小鼠）细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 18 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 19 Expand Image
    使用 Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 对未经（对照）或经 etoposide（25uM，5 小时）（凋亡）处理的 Jurkat 细胞提取物裂解的 caspase-3 进行免疫沉淀法，用同一个抗体进行蛋白质免疫印迹。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 20 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb 对石蜡包埋的人结肠癌细胞进行免疫组织化学分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 21 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb （绿色）和 MAP2 Antibody #4542 （红色）对正常大鼠脑细胞进行免疫荧光分析。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 22 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb （绿色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。
    Effector Caspases and Substrates Antibody Sampler Kit: Image 23 Expand Image
    使用 Lamin A/C (4C11) Mouse mAb（实线）或浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG Isotype Control #5415（虚线），对 HeLa 细胞（绿色）进行流式细胞分析。Anti-mouse IgG (H+L)，F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。
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