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7919
HTScan® Mouse PDGF Receptor α Kinase Assay Kit
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

HTScan® Mouse PDGF Receptor α Kinase Assay Kit #7919

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图 3. 小鼠 PDGFRα 激酶活性的剂量依赖性曲线:使用 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 检测小鼠 PDGFRα 激酶对底物肽 (#1305) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用数量递增的小鼠 PDGFRα 和 1.5 µM 底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 5. Staurosporine 会抑制小鼠 PDGFRα 激酶活性:使用 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 检测小鼠 PDGFRα 激酶对 PDGFRα 底物肽 (#1305) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 60 ng PDGFRα、1.5 µM 底物肽、20 µM ATP 和数量递增的 staurosporine 反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 4. 小鼠 PDGFRα 激酶活性的肽浓度依赖性:使用 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 检测小鼠 PDGFRα 激酶对底物肽 (#1305) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔在室温下用 60 ng PDGFRα 和浓度递增的底物肽反应 30 分钟。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 2. 小鼠 PDGFRα 激酶活性的时程:使用 Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100) #9411 检测小鼠 PDGFRα 激酶对 PDGFRα 底物肽 (#1305) 的磷酸化可产生 DELFIA® 数据。在 50 µl 反应体积中,每个反应孔用 60 ng PDGFRα 和 1.5 µM 底物肽。(DELFIA® 是 PerkinElmer, Inc. 的一个注册商标)。

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图 1. 在使用以下反应条件的放射检测中可检测小鼠 PDGFRα 激酶活性:60 mM HEPES-NaOH (pH 7.5)、5 mM MgCl2、5 mM MnCl2、3 µM 原钒酸钠、1.2 mM DTT、100 µM ATP、250 µM FLT3 (Tyr589) biotinylated peptide 和不同量的重组小鼠 PDGFRα。反应混合物在室温下孵育 10 分钟。

产品说明

该试剂盒提供一种方法来使用重组小鼠 PDGFRα 激酶进行激酶活性检测。它包含活化的 PDGFRα 激酶(以 GST 融合蛋白的形式保存)、生物素化肽底物以及用于检测磷酸化底物肽的磷酸化酪氨酸抗体。

分子式

Peptide substrate, Biotin-FLT3 (Tyr589):1,945 道尔顿。GST-小鼠 PDGFRα 激酶结构域:87 kDa。

背景

血小板源性生长因子 (PDGF) 家族蛋白具有许多二硫键连接的二聚同工型(PDGF AA、PDGF AB、PDGF BB、PDGF CC 和 PDGF DD),这些同工型可以特定方式结合两种紧密相关的受体酪氨酸激酶:PDGF 受体 α (PDGFRα) 和 PDGF 受体 β (PDGFRβ)。PDGFRα 和 PDGFRβ 在其两个胞内激酶结构域之间有75%-85% 的序列同源性,而在激酶插入和羧基末端尾区之间的同源性水平较低 (27%-28%) (1)。PDGFRα 同型二聚体可结合所有 PDGF 同工型(包含 PDGF D 的同工型除外)。PDGFRβ 同型二聚体可结合 PDGF BB 和 DD 同工型以及 PDGF AB 异二聚体。异聚体 PDGF 受体 α/β 可结合 PDGF B、C 和 D 同型二聚体以及 PDGF AB 异二聚体 (2)。PDGFRα 和 PDGFRβ 可各自与 EGFR 形成异二聚体,EGFR 也被 PDGF 激活 (3)。不同细胞的受体总数和受体亚基组成有所不同,这可能是因为不同细胞类型对 PDGF 结合的反应有差异 (4)。结合配体会诱导受体二聚化和自磷酸化,随后结合和激活包含细胞浆 SH2 结构域的信号转导分子,如 GRB2、Src、GAP、PI3 激酶、PLCγ 和 NCK。激活的 PDGF 受体会启动许多不同的信号转导通路,从而调控细胞生长、肌动蛋白重组、迁移和分化 (5)。PDGFRβ 激酶插入区域中的 Tyr751 是 PI3 激酶的锚定位点 (6)。PDGFRβ (pTyr751-Val-Pro-Met-Leu) Tyr751 产生的磷酸化五肽可抑制 PI3 激酶 p85 亚基的羧基末端 SH2 结构域与 PDGFRβ 的结合 (7)。PDGFRβ 介导的 PI3 激酶激活也需要 Tyr740 (8)。

  1. Deuel, T.F. et al. (1988) Biofactors 1, 213-7.
  2. Bergsten, E. et al. (2001) Nat Cell Biol 3, 512-6.
  3. Betsholtz, C. et al. (2001) Bioessays 23, 494-507.
  4. Coughlin, S.R. et al. (1988) Prog Clin Biol Res 266, 39-45.
  5. Ostman, A. and Heldin, C.H. (2001) Adv Cancer Res 80, 1-38.
  6. Panayotou, G. et al. (1992) EMBO J 11, 4261-72.
  7. Ramalingam, K. et al. (1995) Bioorg Med Chem 3, 1263-72.
  8. Kashishian, A. et al. (1992) EMBO J 11, 1373-82.

通路和蛋白

探索与本品相关的通路 + 蛋白。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
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