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REACTIVITY | H M R |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠
使用与小鼠 XBP-1s 蛋白中 Ala361 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
蛋白质合成后,分泌蛋白、细胞器内蛋白和跨膜蛋白转位到内质网 (ER) 中进行翻译后修饰和正确折叠。内质网中未折叠蛋白的聚集会触发一个称为未折叠蛋白反应 (UPR) 的适应性机制,该机制可防止蛋白折叠出错 (1)。跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶 IRE1 最初在酿酒酵母中被发现,它是一种 UPR 的近端感应蛋白,能在内质网膜中传输未折叠蛋白的信号 (2-4)。之后发现的人同源物 IRE1α 在人组织中普遍表达 (5)。未折叠蛋白反应激活时,IRE1α 利用其内切核糖核酸酶活性,通过一个非常规机制剪切 X 盒结合蛋白 1 (XBP-1) mRNA (6)。这种反应将 XBP-1 从未剪切的 XBP-1u 同工型转化为已剪切的 XBP-1s 同工型,这是一种有效的转录激活因子,能诱导多个 UPR 应答基因的表达 (6)。
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