染色质免疫沉淀法技术支持

为了确保及时地获取解决方案，请在联系我们时准备好以下信息。

在使用本技术报告之前，您是否已查阅我们的染色质免疫沉淀法 (ChIP) 故障排除指南？

常见问题

1. 产品目录编号（ChIP 试剂盒和/或抗体）
2. 印在试管上的批号和参考日期。

染色质制备

1. 列出使用的细胞类型和治疗。黏附或悬浮细胞？
2. 给出染色质制备中所使用的细胞总数，并阐明如何确定细胞数量。
3. 固定时间和甲醛浓度。
4. 提供核酸酶消化条件（时间、温度、添加的核酸酶量、消化总量）。
5. 在 1x ChIP 缓冲液中溶解沉淀物后放在冰上的时间
6. 提供超声条件（脉冲数、每次超声时间以及脉冲期间放在冰上的时间）。
7. 超声模式（包括探针大小以及超声设置）。
8. 纯化后染色质 DNA 样品的浓度（参见实验步骤的 B 部分）。

染色质免疫沉淀法 (ChIP)

1. 列出 IP 使用的抗体。提供每次 IP 使用的抗体数量（μg 或 μl）、抗体来源以及抗体是否经IP 或 ChIP 验证。
2. 每次 IP 添加的染色质数量 (μg)。
3. 抗体和染色质的孵育时间。
4. 使用的蛋白 G 珠类型（磁珠或琼脂糖珠）。
5. 与珠子一起孵育的时间。
6. 洗脱条件（时间和温度）。
7. 解交联条件（时间和温度）。

IP 富集的检测和定量分析

1. 定量方法（标准 PCR、定量 PCR、ChIP-on-chip、ChIP-seq）。
2. PCR 循环数以及检测的靶标 DNA 位点。
3. PCR 分析是否使用梯度稀释的 2% 输入对照组DNA 测试所使用的引物对 （参见 G 部分步骤 1 的描述）？
4. 输入对照组 DNA 梯度稀释后的线性PCR 结果是否使用了此引物对？
5. 引物对的 PCR 计算效率是多少（仅针对定量 PCR 用户）？
6. 使用对照 Histone H3 Antibody (#4620) 是否显示出对 RPL30 启动子的富集？如果是，那么富集量是多少（用添加至 IP 反应的输入染色质总量的百分比表示）？
7. 使用 Normal Rabbit IgG (#2729) 的 RPL30 启动子的富集量是多少（用染色质输入总量的百分比表示）？
8. 使用对照 Histone H3 Antibody (#4620) 是否出现靶位点的富集？如果是，那么富集量是多少（用染色质输入总量的百分比表示）？
9. 使用 Normal Rabbit IgG (#2729) 的靶位点的富集量是多少（用染色质输入总量的百分比表示）？
10. 检测抗体是否对靶位点进行了富集。如果是，那么富集量是多少（用染色质输入总量的百分比表示）？