Akt 信号转导

磷脂结合以及羧基末端 Ser473 磷酸化均会激活 Akt。

对未经处理或已经 LY294002 #9901（一种会抑制 Akt 磷酸化的特殊 PI3 激酶抑制剂）处理的 LNCaP 前列腺癌细胞沉淀物（结果图 A）以及人乳腺癌细胞（结果图 B）进行 IHC。

首先对细胞沉淀物确定 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060 和竞争对手的磷酸化 Akt 抗体的最佳稀释度（结果图 A）。

随后使用这种稀释度来对人乳腺癌组织比较两种抗体（结果图 B）。#4060 的靶标特异性染色显著较强，并且比公司 1 的抗体更为明显。

在对细胞沉淀物进行检测时，抗体染色虽然看起来十分相似，但组织染色需要较高水平的抗体敏感性，因此 #4060 是更适合对组织切片进行 IHC 的抗体。

结果图 A.

功能：磷脂结合以及羧基末端 Ser473 磷酸化均会激活 Akt。

样品：C2C12 小鼠肌祖细胞用 LY294002 #9901（一种会抑制 Akt 磷酸化的特殊 PI3 激酶抑制剂）或会诱导 Akt 磷酸化的胰岛素处理。

结果：实验中使用的抗体浓度如下：

• #4060 的浓度为 0.375 μg/ml
• 竞争对手 1 抗体的浓度为 0.5 或 2 μg/ml

• 在用胰岛素刺激后，使用 CST 的 #4060（绿色）对起皱的膜/前缘堆积物进行适当染色，并且显示在经 LY294002 处理的细胞上几乎没有染色。
• 公司 1 抗体（浓度为 2 μg/ml）显示出非常高的细胞浆染色，其中在经 LY294002 处理的细胞中有一些分散的胞核背景，信号强度与在经胰岛素处理的细胞中的 #4060 具有可比性。稀释度为 0.5 μg/ml 时，在经胰岛素处理的细胞中，竞争公司 1 抗体信号较 #4060 弱。

该数据表明，使用更少 #4060 抗体可产生更强的信号。

结果图 B.

结果： 实验中使用的抗体浓度如下：

• #4060 的浓度为 0.375 μg/ml
• 公司 2 抗体的浓度为 0.625-1.25 μg/ml

• 在用胰岛素刺激后，使用 #4060（绿色）对起皱的膜/前缘堆积物进行适当染色，并且显示在经 LY294002 处理的细胞上几乎没有染色。
• 公司 2 抗体（浓度为 1.25 μg/ml）在经 LY294002 和胰岛素处理的细胞（背景更高）中均显示出明显的胞核背景。抗体浓度为 0.625 μg/ml 时，在用胰岛素处理的细胞中几乎无法检测到信号。

该数据表明，使用更少 #4060 抗体可产生更强的信号。

功能：磷脂结合和羧基末端 Ser473 磷酸化会激活 Akt。

样品：Jurkat 细胞用 Calyculin A #9902（一种有效的磷酸酶抑制剂）处理来保留现存的 Akt 磷酸化水平，或用 LY294002 #9901（一种特殊的 PI3 激酶抑制剂）处理，以通过 PI3 激酶抑制 Akt 磷酸化。

• CST 的 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP^® Rabbit mAb #4060 在经 Calyculin A 处理的 Jurkat 裂解物中可识别出 60 kDa 的高特异性条带。
• 公司 1 的磷酸化 Akt (Ser473) 兔多克隆抗体可识别出相应条带以及大约 75 kDa 的交叉反应性条带。该抗体对磷酸化 Akt 没有特异性。
• 除了相应条带，公司 2 的磷酸化 Akt (Ser473) 兔多克隆抗体还显示出明显的背景条带，并且目的条带的信号较其他交叉反应性条带弱。